干货| 核酸电泳解决方案

凝胶电泳是分子生物学中鉴定、量化和纯化核酸的常用实验技术。琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化核酸片段的标准方法，因其快速便捷和通用性广，被广泛应用于核酸的分离和分析。 

核酸在碱性缓冲液环境下带负电荷，当受到电场作用时会通过琼脂糖凝胶介质从负极（阴极）向正极（阳极）迁移，不同核酸分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率也不同，较短的碎片比较长的碎片移动得更快，从而能达到分离的效果。在凝胶中加入染料，可对分离的核酸进行检测，加入 Marker可以相对确定片段的大小。

那么，进行核酸电泳实验有没有什么小妙招呢？今天，莫纳丽莎就来为大家介绍一下——如何进行标准的琼脂糖凝胶电泳操作！满满的干货，为你的实验全面助力！

一、准备工作
在正式开始电泳实验之前，首先要进行必要的准备工作：
01明确样品信息与电泳信息
样品信息确定DNA样品或者RNA样品数量，片段的大小，浓度；
电泳信息确定胶浓度、制胶大小以及电泳条件。

我们要先根据所分离片段大小的不同，明确最适宜的琼脂糖浓度。下表就为大家列出了不同琼脂糖凝胶浓度所对应的线性DNA最佳分辨范围：

02样品准备
PCR扩增产物检测配制PCR体系，PCR仪上运行程序，反应完成后取出；
酶切产物检测配制酶切体系，利用水浴锅或者金属浴进行反应，反应完成后取出；
总DNA/RNA检测提取核酸样品，在DNA样品或者RNA样品中加入上样缓冲液（loadingbuffer），混匀备用。
03确认仪器
确认电泳相关仪器可正常使用，包括水平电泳槽、电泳仪电源等。

二、开始电泳实验
01制胶
以制作1%的胶为例，称取0.5g琼脂糖加入50ml 1.0×TAE缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀。然后向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入核酸染料溶液（或者电泳后用染料溶液浸泡染色）。再将琼脂糖小心倒入胶槽内，插好梳子（注意保证制胶模具和梳子的洁净）。
室温下20~30分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内，向槽内加入1.0×TAE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。
02上样
用微量移液枪将样品小心加入样品槽中，总体积不可超过样品槽容量。注意上样时小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
03电泳
盖好电泳上盖，接通电源，切记DNA样品由负极往正极泳动。一般当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时，停止电泳。未加染料的胶在电泳完毕后移核酸溶液中，室温下染色10~30分钟。

依照核酸片段大小进行分离

04凝胶成像与条带分析

琼脂糖凝胶电泳成像图片
纵然每个人都希望得到完美的电泳条带，但是在实际的实验中还是会遇到各种各样的问题，导致跑出的结果不尽人意。
为此，莫纳丽莎总结了一些核酸电泳的常见问题与解决方案，希望可以给到大家一些帮助。以下是不是也有你正在苦苦追寻的答案呢？一起来看看吧！

三、常见问题与解决方案
Q1无条带或几乎看不到条带

Q2条带拖尾、弥散或分离效果不佳

Q3分离或迁移异常

好了，今天的核酸电泳解决方案就分享到这里啦！不知道大家是否在这篇干货里找到自己实验的影子呢？
欢迎莫粉儿们留言分享自己的实验心得与体会，让我们都在共同得交流学习中成为更出色的科研人！

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